рефераты

Рефераты

рефераты   Главная
рефераты   Краткое содержание
      произведений
рефераты   Архитектура
рефераты   Астрономия
рефераты   Банковское дело
      и кредитование
рефераты   Безопасность
      жизнедеятельности
рефераты   Биографии
рефераты   Биология
рефераты   Биржевое дело
рефераты   Бухгалтерия и аудит
рефераты   Военное дело
рефераты   География
рефераты   Геодезия
рефераты   Геология
рефераты   Гражданская оборона
рефераты   Животные
рефераты   Здоровье
рефераты   Земельное право
рефераты   Иностранные языки
      лингвистика
рефераты   Искусство
рефераты   Историческая личность
рефераты   История
рефераты   История отечественного
      государства и права
рефераты   История политичиских
      учений
рефераты   История техники
рефераты   Компьютерные сети
рефераты   Компьютеры ЭВМ
рефераты   Криминалистика и
      криминология
рефераты   Культурология
рефераты   Литература
рефераты   Литература языковедение
рефераты   Маркетинг товароведение
      реклама
рефераты   Математика
рефераты   Материаловедение
рефераты   Медицина
рефераты   Медицина здоровье отдых
рефераты   Менеджмент (теория
      управления и организации)
рефераты   Металлургия
рефераты   Москвоведение
рефераты   Музыка
рефераты   Наука и техника
рефераты   Нотариат
рефераты   Общениеэтика семья брак
рефераты   Педагогика
рефераты   Право
рефераты   Программирование
      базы данных
рефераты   Программное обеспечение
рефераты   Промышленность
      сельское хозяйство
рефераты   Психология
рефераты   Радиоэлектроника
      компьютеры
      и перифирийные устройства
рефераты   Реклама
рефераты   Религия
рефераты   Сексология
рефераты   Социология
рефераты   Теория государства и права
рефераты   Технология
рефераты   Физика
рефераты   Физкультура и спорт
рефераты   Философия
рефераты   Финансовое право
рефераты   Химия - рефераты
рефераты   Хозяйственное право
рефераты   Ценный бумаги
рефераты   Экологическое право
рефераты   Экология
рефераты   Экономика
рефераты   Экономика
      предпринимательство
рефераты   Юридическая психология

 
 
 

Диагностика стафилококковых инфекций


Владивостокский
Государственный Медицинский  Университет
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
РЕФЕРАТ
Диагностика стафилококковых
инфекций
Выполнил: Новак А.Л.
301 гр., л/ф
Владивосток, 1998.
Предисловие
Несмотря на то, что
стафилококки принадлежат к числу наиболее легко обнаруживаемых и распозна­ваемых
микроорганизмов, не требующих сложных диагностических приемов для их выявления,
в прак­тической работе микробиологи до сих пор испыты­вают определенные
трудности при установлении их причинной роли в ряде различных заболеваний. С од­ной
стороны, присутствие патогенных стафилококков, обнаруживаемое в исследуемом
материале, не всегда является убедительным доказательством их этиоло­гического
значения. С другой, учитывая большое разнообразие проявлений биологической
активности этих микробов, зависящее от разных, не всегда под­дающихся учету
факторов, широкую их изменчивость под влиянием лекарственных веществ и самого
мак­роорганизма, довольно сложно бывает определить их потенциальную патогенность.
Наконец, третья причи­на связана с тем, что стафилококки являются пред­ставителями
нормальной микрофлоры из группы условно патогенных микроорганизмов и, наряду с
не­патогенными, патогенные представители обитают в организме людей,
распространяясь при этом весьма неравномерно на разные участки человеческого
тела.
Если выделение патогенного
стафилококка, из кро­ви больных людей и различных полостей, которые принято
считать стерильными, в подавляющем боль­шинстве случаев может служить
доказательством его роли как возбудителя болезни, то присутствие ста­филококков
на слизистых зева, носа и т. д. даже при явном болезненном состоянии их требует
большой осторожности исследователя в выводах об этиологии данных заболеваний.
Поэтому, естественно, не
может быть общих ре­комендаций, как при диагностике
различных стафи­лококковых инфекций, так и при микробиологических исследованиях
участков тела человека и разных объ­ектов внешней среды. Широкий обмен мнениями между
микробиолога­ми научных учреждений и практических лаборато­рий, осуществляемый
на съездах и конференциях, посвященных проблемам стафилококковых инфекций, а
также при личных контактах, казалось бы, должен был привести к
определенным взглядам на различ­ные методы исследования, предлагаемые для выде­ления
и идентификации стафилококков. Однако боль­шое число запросов, поступающих из
лабораторий СЭС и лечебных учреждений, свидетельствует о яв­ных затруднениях,
которые возникают у исследова­телей при решении разных вопросов микробиологи­ческой
диагностики стафилококков, а в ряде микро­биологических учреждений бытуют еще
некоторые устаревшие методы и приемы, приводящие к непра­вильным оценкам и даже
досадным недоразумениям.
Важным условием
эффективности лабораторной диагностики является сочетанное определение каче­ственных
и количественных критериев содержания патогенных стафилококков в исследуемом
материале. Исходя из этого, я считаю необходимым изложить ряд методов основных
микробиологических исследо­ваний, наиболее простых и доступных для каждой
практической и научной лаборатории, которыми мы пользуемся в течение многих
лет.
ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ
ОБНАРУЖЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ СТАФИЛОКОККОВ
Предварительная диагностика
стафилококков мо­жет основываться на бактериоскопическом изучении препаратов —
мазков, окрашенных по Граму. Пато­генные стафилококки, помимо гроздевидного
распо­ложения, характеризуются правильной сферической формой клеток.
Обнаружение стафилококков, нахо­дящихся внутри клеток, позволяет дать ответ о
на­личии стафилококковой инфекции. В большинстве же случаев для точного
установления патогенности об­наруженных стафилококков требуется выделить эти
микроорганизмы в чистой культуре путем посева исследуемого материала на плотные
питательные среды.
В настоящее время
ассортимент дифференциаль­ных, элективных и накопительных сред, предложен­ных
для выделения патогенных стафилококков, весь­ма значителен и продолжает
расширяться. Многие исследователи на основе знания основных биохими­ческих
характеристик и питательных потребностей патогенных стафилококков при конструировании
сред стремятся повысить их высеваемость и обеспечить возможность осуществлять
их количественный учет, получить надежный способ отличать потенциально
болезнетворные стафилококки от сапрофитов.
Употребление жидких
накопительных сред для первичного выделения стафилококков нецелесообраз­но, так
как лишает исследователя возможности количественной оценки содержания микробов
в об­следуемых объектах, а при случайных загрязнениях способствует ошибкам.
Особенно это относится к та­ким исследованиям, как обнаружение носительства
патогенных стафилококков, где доказательством яв­ляется лишь массивный рост,
либо определение этио­логической роли этих микроорганизмов "при пищевых
отравлениях или наружных воспалительных процес­сах. Если же речь идет об
исследовании крови, а так­же о тех немногих случаях, когда бывает необходимо
выявить даже единичные жизнеспособные особи этих микробов, например при
контроле эффективности дезинфекции, проверке на стерильность или титрационных
посевах, то в подобных случаях ис­пользование накопительных сред вполне оправ­дано.
Из большого числа
разнообразных питательных сред, опробованных для первичного выделения ста­филококков,
в практике оправдал,;1' себя немногие. Обычный питательный агар (рН 7,2 7,4),
приготов­ленный путем добавления 2% агар-агара к мясопептонному бульону или к
триптическому перевару Хоттингера, может быть использован при исследова­нии
экссудатов из закрытых полостей. Стафилококки вырастают через 18—24 ч инкубации
при 37° С в виде гладких блестящих с ровными краями непрозрачных и слегка
выпуклых колоний. Характер пигмента вы­является лучше после дополнительного
суточного выдерживания чашек при комнатной температуре (20° С) на свету. Если в
исследуемом материале при­сутствует посторонняя флора, то по внешнему виду
колонии стафилококков могут быть трудно отличимы.
Употребление кровяного агара
дает возможность, кроме выявления пигмента, определить и гемолитическую
активность стафилококков. При этом необхо­димо помнить, что гемолитическая
способность, определяемая на чашках с кровяным агаром, зависит от многих
факторов — вида крови, ее концентрации, наличия в ней антитоксинов, толщины
слоя среды, содержания углекислого газа в атмосфере культиви­рования, густоты
посева, присутствия и характера со­путствующей флоры и т. д.
При отборе колоний с
кровяного агара необходи­мо отвивать как гемолитические, так и не дающие
гемолиза, особенно если исследование проводится на среде с человеческой или
лошадиной кровью, а от­сутствие гемолиза на таких средах не позволяет за­ключить
об отсутствии вообще гемолитической актив­ности. Поэтому использование
кровяного агара для первичного посева целесообразно только при обсле­довании
объектов, не содержащих посторонней мик­рофлоры, и желательно добавлять в
питательную среду кровь кролика или барана.
Если же проводится
исследование гноя открытых ран или отделяемого язв или свищей, то следует
пользоваться элективно-дифференциальной средой для  стафилококков — желточно-солевым 
агаром (ЖСА) Г. Н. Чистовича. Элективность этой среды обеспечивается высоким
содержанием хлористого натрия, а добавленный яичный желток позволяет вы­являть
лецитовителлазную   активность,   которая является одним из показателей
патогенности стафило­кокков и в силу этого ЖСА более четко дифференци­рует
патогенных представителей, чем кровяной агар. Приготовление ЖСА несложно.
Заготовляют впрок и
стерилизуют в автоклаве при 120 °С" в течение 20 мин питательный агар (МПА
или Хоттингера) рН 7,2—7,4, содержащий 10% поваренной соли. Перед употреблением
солевой питательный агар растапливают, остужают до 45—50 °С и добавляют к нему
20% по объему стерильной желточной взве­си (1 желток куриного яйца на 200 мл
физиологического рас­твора). Для лучшего эмульсирования желательно иметь колбы
со стеклянными бусами. После тщательного перемешивания среду разливают по 20—25
мл в чашки, которые могут храниться в хо­лодильнике в течение нескольких дней.
Следует производить
массивный посев исследуе­мого материала на чашки с ЖСА, а инкубацию вести в
течение 2 суток при 35—37° С. Посторонняя флора резко подавляется, стафилококки
же на ЖСА выра­стают практически в чистой культуре. Непосредст­венно при
просмотре чашек вокруг колоний отме­чается образование радужных венчиков и
мутной зоны — лецитовителлазная 
реакция.  Такие колонии, не менее
двух из каждого посева, отвивают на скошенный мясо-пептонный агар для последую­щей
проверки выросших культур в реакции плазмо-коагуляции.
Чтобы избежать ошибок в
определении желточ­ной реакции, необходимо иметь в виду, что иногда наблюдается
помутнение среды без радужного обод­ка, в этом случае проба на лецитовителлазу
считает­ся отрицательной. Если же колонии, выросшие на ЖСА, не дают
лецитовителлазной реакции, т. е. не окружены радужным венчиком, но имеется рост
ста­филококков, то их тоже считают подозрительными и также отвивают не менее
двух из каждого такого посева на чашки с простым питательным агаром пятнами
диаметром 5—10 мм. После суточного инкубирования при 37° С полученные
макроколонии про­веряют в реакции плазмоагглютинации, для чего микробную массу
размешивают петлей на стекле в каплях цитратной кроличьей или человеческой плаз­мы,
разведенной 1 :4. Образование хлопьев учиты­вают в течение 30с—1 мин. При
наличии плазмоаг­глютинации такие штаммы считают подозрительными и отвивают на
скошенный агар для дальнейшего изу­чения в коагулазной реакции. При таком
отборе число пропускаемых штаммов патогенных стафило­кокков человеческого
происхождения невелико, куль­туры же, выделенные от животных, требуется прове­рять
в реакции плазмокоагуляции.
Коагулазная проба является
основным признаком, определяющим болезнетворность стафилококков, по­этому ее
постановка требует к себе максимального внимания. Для выявления коагулазной
активности у стафилококков, выделенных от людей, можно поль­зоваться как
цельной кровью, так и плазмой кроли­ков или человека. Можно использовать также
кровь или плазму, взятую непосредственно от человека. Консервированная плазма
или кровь, используемые для переливания, непригодны для реакции, так как к ним
часто добавляются консерванты, которые пре­пятствуют жизнедеятельности
стафилококков, прояв­лению коагулазной активности. Не следует приме­нять кровь
животных или людей, переносящих стафи­лококковые заболевания, в особенности
затяжные, так как она может оказаться нестерильной и содержать антикоагулазу. При
работе со стафилококками, выде­ленными от рогатого скота, можно пользоваться бы­чьей
кровью.
Асептично взятую кровь
стабилизируют с помощью 1—4% цитрата или 0,1% оксалата. Для получения плазмы
нитратную кровь центрифугируют или отстаивают на холоду. Но, как уже
говорилось, можно пользоваться и цельной кровью. Затем кровь разводят
стерильным физиологическим раствором в соотношении 1 : 3 или 1 : 5 и разливают
по 0,2—0,3 мл в стерильные пробирки, которые перед стерилизацией должны быть
тщательно вымыты, так как остатки химических веществ могут влиять на результат
плазмокоагуляции.
Испытуемые агаровые культуры
стафилококков вносят пет­лей в плазму и хорошо перемешивают. Бульонные культуры
вно­сят пипеткой в объеме 0,1 мл В каждом опыте необходимо ста­вить контроль с
культурами заведомо патогенных стафилококков, дающих коагулазную реакцию, и
штаммами коагулазоотрицатель-ных микроорганизмов. Кроме того, часть пробирок с
разлитой плазмой следует оставлять не засеянной микробами и выдержи­вать в
термостате на протяжении всего срока опыта. В случае наступления коагуляции
хотя бы в одной из них весь опыт нужно переставить с новой порцией крови.
Пробирки с исследуемыми культурами выдерживают в термостате при 37 °С в течение
су­ток. Учет результатов проводится обязательно дважды: через 2—3 ч и 24 ч.
Учитывают свертывание плазмы и образование сгустков. Обычно культуры, активно
продуцирующие коагулазу, дают положительную реакцию уже через 2—3 ч. а если они
обла­дают и выраженной фибринолитической активностью, то перво­начально
образовавшиеся сгустки могут подвергнуться расплавлению к концу суток.
Слабокоагулирующие штаммы могут давать положительную реакцию в поздние сроки—к
концу суток. Опыты, давшие сомнительный результат, необходимо повторить.
Некоторые исследователи, получив
отрицательный или сомни­тельный результат, оставляют пробирки на столе. Этого
делать нельзя, так как свертывание плазмы в более поздние сроки мо­жет носить
не специфический характер и его не следует прини­мать во внимание.
Стафилококки, дающие положительную
коагу­лазную пробу, должны рассматриваться как потен­циально патогенные,
независимо от наличия или от­сутствия у них гемолитических свойств и характера
пигмента, их относят к виду St. aureus и в дальней­шем подвергают
фаготипизации и проверке на чув­ствительность к антибио­тикам.
Углубленное изучение
стафилококков показало, что основной признак па-тогенности — коагулазная
реакция может под­вергаться  
изменчивости при воздействии различ­ных факторов (Г. Н. Чистович, 1961;
Е. М. Паде­рина, 1966), поэтому в ряде случаев, при выде­лении
коагулазонегативных стафилококков в мо­нокультуре из патологи­ческих очагов,
целесооб­разно изучить у них дру­гие признаки потенциаль­ной болезнетворности и
прежде всего — способ­ность ферментировать маннит в анаэробных условиях.
Известно, что среди коагулазоотрицательных часть культур обладает способностью
расщеплять маннит в анаэробных условиях (8,4% —по данным А. А. Ака­това и М. Л.
Хатеневер, 1974).
Определение ферментации
маннита в анаэробных условиях технически очень просто и осуществляется путем
посева уколом исследуемых культур в пробирки с высоким столбиком полу­жидкого
агара Хоттннгера, содержащего 1% маннита и 0,004% индикатора бромкрезолпурпура
или бромтимолблау (рН == 7,2). Эту среду перед посевом «регенерируют», т. е.
кипятят в водяной бане, быстро охлаждают, а после посева заливают слоем сте­рильного
вазелинового масла. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 5 дней. Однако в
значительном числе случаев результаты могут быть учтены уже через сутки.
Наряду с реакцией
плазмокоагуляции, большое значение приобрела еще одна важная способность
стафилококков, характеризующая их потенциальную патогенность,
дезоксирибонуклеазная   активность.
Многие исследователи сообщают о высокой корреля­ции этого признака с коагулазной
активностью и токсигенностью изучаемых культур; отмечают, что стафилококки,
выделенные из патологического мате­риала, как правило, обладают ДНК-азой.
Коагула-зопозитивные штаммы, полученные от носителей, могут не иметь этого
фермента, и обычно отсутствие дезоксирибонуклеазной активности сочетается с низ­кой
биохимической способностью и атоксигенностью таких культур стафилококков.
По наблюдениям некоторых
исследователей, сре­ди коагулазонегативных штаммов стафилококков, но обладавших
другими признаками патогенности, вы­деленных в ряде случаев от больных с
различными гнойными инфекциями, дезоксирибонуклеазную ак­тивность проявляли от
10 до 29% таких культур (И. И. Панышева и сотр., 1967;
Franklin и
соавт., 1966; Lierd и Golde, 1970).
В настоящее время этот тест
может служить на­дежным дифференциальным признаком между пато­генными и
непатогенными стафилококками и в то же время может помочь в дифференциации
степени патогенности коагулазопозитивных штаммов и, без­условно, привлечет
внимание к коагулазонегативным, но обладающим этим ферментом культурам ста­филококков
и в ряде случаев позволит отнести по­следние к болезнетворным формам с большей
уве­ренностью.
Методика определения
дезоксирибонуклеазной активности не­сложна, в основу ее положен метод
Джеффриса. Готовят впрок 2% МПА (рН—8,6), содержащий ДНК (2 мг/мл среды), разли­вают
по флаконам и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. Перед разливом в
чашки к среде добавляют CaCIa (0,8 мг/мл). На подсушенную
среду засевают суточные культуры стафилокок­ков. После инкубации в течение
18—20 ч при 37°, на поверхность среды наливают IN раствор НС1 и через 7—10
мин учитывают зоны просветления, которые оценивают крестами (Н. Б. Морд­винова
и соавт., 1967).
Нами предложен более
экономичный метод для обнаружения ДНК-азы у микроорганизмов. Этот спо­соб,
помимо уменьшения в 2 раза расхода ДНК на каждый опыт, позволяет использовать
более деше­вую низкополимерную нуклеиновую кислоту, изго­товляемую Олайнским
заводом химических реакти­вов. Предлагаемая методика широко апробирована на
кафедре микробиологии ЛСГМИ и по качеству результатов не уступает общепринятой.
Поэтому мы приводим ее подробное описание.
Для приготовления рабочего
раствора ДНК, навеску нуклеи­новой кислоты из расчета 10 мг/мл помещают в
дистиллирован­ную воду, добавляют 0,5 мл 0,2% (или 0,8%) раствора NaOH на
каждые 10 мл воды. Для лучшего растворения ДНК смесь либо нагревают до кипения
в водяной бане при постоянном перемеши­вании стеклянной палочкой, либо
оставляют на ночь при 37 °С в термостате. К расплавленному и остуженному до 50
°С МПА добавляют рабочий раствор ДНК из расчета 1 мг/мл (на 9 мл МПА—1 мл
раствора ДНК), перемешивают, разливают по10л(л в пробирки, стерилизуют текучим
паром в течение 30 мин или в автоклаве при 0,5 атмосферы в течение 20 мин. Срок
хранения— 1—2 мес.
При постановке опыта
столбики агара с ДНК растапливают, в водяной бане добавляют 0,1 мл
официнального стерильного 10% р-ра СаСЬ, перемешивают и выливают на слой хорошо
под­сушенного питательного агара в чашки Петри и вновь подсуши­вают. Суточную
агаровую культуру засевают маленькими бляш­ками (диаметр равен 2—2,5 мм) или
штампом-репликатором не более 20—25 бляшек, во избежание слияния зон
деполимериза­ции ДНК. После 18—20-часовой инкубации поверхность агара за­ливают
5 мл IN раствора НС1 и через 3—5 мин учитывают зоны просветления. Реакции
оценивают в крестах.
При этом следует учесть, что
интенсивность зоны деполиме­ризации на плотной среде не всегда совпадает с
количеством про­дукции этого фермента у исследуемых стафилококков в жидких средах.
Для обнаружения
фибринолизина исполь­зуют несколько усовершенствованный метод Кристи с сотр.
Среда Кристи—Чепмена имеет
следующий состав: мясной экстракт—0,45 г, пептон—0,75 г, хлористый натрий—1,2
г, агар—2,75 г, вода—130 мл, рН среды == 7,0. Стерилизуется в автоклаве и
сохраняется впрок.
Перед опытом среду
растапливают, остужают до 50 °С и до­бавляют 15—20% стерильной цитратной
человеческой плазмы. Смесь прогревается в водяной бане при 65—70°С в течение 2—
5 мин до появления ясной мути, а затем разливается в чашки. Испытуемые культуры
засевают «пятнами» по 15—20 на чашку.                                             Посевы инкубируют при
37 °С. Учитывается образование зон про­светления вокруг колонии первоначально
через 14 ч, затем через 24 и 48 ч, так как реакция у различных культур течет
неодина­ково быстро и у ряда штаммов она развивается в более поздние сроки.
Фибринолитический тест мы
считаем весьма при­годным для определения потенциальной болезнетворности
стафилококков, но оцениваем только в комп­лексе с другими признаками
активности.
Гиалуронидазная активность
опреде­ляется   по методу Мак-Клина в
модификации М. Ш. Могилевского и Л. С. Коган (1949).
Раствор гиалуроната дающий в
присутствии 2 N уксусной кислоты типичный сгусток, разливается по 0,5 мл в
стерильные пробирки. Добавляется 0,5 мл суточной культуры стафилококка в
пептонной воде. Контролями служат: гиалуропат + дистилли­рованная вода и
гиалуропат + незасеянная среда. Смеси встря­хиваются и выдерживаются при 37 °С
15—20 мин. Затем в каж­дую пробирку добавляется по две капли 2 N раствора
уксусной кислоты и встряхивается. В контролях должен образоваться сли­зистый
комочек. В опыте при наличии гиалуронидазы он отсут­ствует, что свидетельствует
о деполимеризации гиалуроновой кис­лоты микробным ферментом.
Для изучения токсигенности
стафи­лококков удобно пользоваться методом, предло­женным Илеком и Леви (1950),
позволяющим опре­делить типы гемолизинов.
С этой целью готовятся чашки
с питательным агаром, содер­жащим 5% отмытых физиологическим раствором
эритроцитов барана, кролика и человека.
На поверхность питательной
среды по диаметру помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги, смоченную
альфа-антитоксической сывороткой. Отступив 1—2 мл от края полоски,
перпендикулярно к ней засеивают штрихами исследуемые куль­туры. Посевы
инкубируют при 37 °С в течение суток, после чего учитывают результаты.
Альфа-гемолиз проявляется в
виде полного просветления среды вокруг штриха культуры и нейтрализуется
альфа-антиток­сической сывороткой. Он выявляется на средах с кроличьими и
бараньими эритроцитами
Бета-гемолиз на агаре с
бараньей кровью дает частичное просветление, зона которого имеет
буровато-пурпурный оттенок. Это «тепло-холодовый» токсин и лучше выявляется
после до­полнительного суточного выдерживания чашек в холодильнике при
температуре +4 °С по характерному послойному гемолизу бараньих эритроцитов и не
централизуется альфа-антитоксиче­ской сывороткой. На кроличьих эритроцитах он
не активен. Дельта-гемолизин определяется по узкой полоске гемолиза бараньих и
кроличьих эритроцитов, не нейтрализуется альфа-антитоксической сывороткой.
Однако образование дельта-гемоли-зина на этих чашках может быть замаскировано
действием аль­фа-токсина и поэтому его следует проверять на средах с эритро­цитами
человека или лошади. Таким образом, для определения всех 3 типов гемолизинов
достаточно использовать эритроциты барана и человека или лошади.
Для определения
вирулентности ста­филококков существуют несколько различных методов заражения
белых мышей.
Наиболее простым является
введение 0,1 мл суточной бульон­ной культуры испытуемого стафилококка в
хвостовую вену. Учет гибели животных осуществляется в течение 10 суток,
регистри­руют наличие абсцессов в почках.
Удобно пользоваться способом Badenski
и сотр. (1958), Су­точная бульонная культура центрифугируется при 3000 об/мин —
30 мин. Полученный осадок ресуспендируется в половинном объ­еме декантата и в
количестве 0,05 мл вводится 6 мышам позади глазного яблока в окологлазничную
клетчатку. Культуру, вызы­вающую гибель половины и более зараженных мышей в
течение 6 дней, считают вирулентной.
При этих методах заражения
вирулентной куль­турой у животных развивается общин септический процесс с
преимущественным поражением почек. Основная гибель мышеи происходит на 3—5-й
день после заражения.
Другие способы заражения
белых мышей (внутрибрюшинный и интраназальный) требуют в десятки
раз большей заражающей дозы,
максимум гибели мышей приходится на 1—2-е сутки, что характери­зует
преимущественно токсический компонент про­цесса (С. А. Анатолий, И. И.
Антоновская, 1967).
В то же время ряд
исследователей отдают пред­почтение более простому технически внутрибрюшинному
способу заражения мышей, который одновре­менно позволяет изучать клеточные и
гуморальные механизмы развития инфекции.
Сопоставление вирулентности
стафилококков для белых мышей с отдельными факторами их патогенности показало,
что вирулентность штаммов, по дан­ным большого числа исследователей,
коррелирует с уровнем альфа-гемотоксина. Что касается других признаков
патогенности и их корреляции с вирулент­ностью, то получены разноречивые
сведения. Так, по данным С. А. Анатолия (1969), вирулентность штам­мов
коррелировала с продукцией бета-гемолизина, летального фактора,
лецитовителлазы, гиалуронидазы и коагулазы. А. К. Акатов (1968) не отмечает кор­реляции
вирулентности с коагулазной, лециговител-лазной, фибринолитической активностью,
не установ­лена корреляция с дельта-токсигенностью.
Для сравнения вирулентности
стафилококковых культур можно использовать их способность вызы­вать дермонекротическую
реакцию у кроликов.
Готовят 4-миллиардную взвесь
суточной агаровой культуры стафилококка в физиологическом растворе, а из
полученной гу­стоты делают разведения, чтобы получить 2- и 1-миллиардные
взвеси. Из каждого разведения в объеме 0,1 мл, что составляет 100, 200, 400
миллионов микробных тел, вводят кролику в вы­стриженную или депилированную
накануне кожу. На одном кро­лике можно одновременно поставить до 8 внутрикожных
проб. Ежедневно отмечают проявления дермонекротической реакции, а окончательно
на 4-е сутки. За минимальную дермонекротиче­скую дозу принимают то наименьшее
количество культуры, кото­рое дает некроз на 4-е сутки (Г. В. Выгодчиков,
1963).
Список использованной
литературы
1.
А.М.Смирнова, А.А.Трояшкин, Е.М.Падерина:
микробиология и профилактика стафилококковых инфекций – «Медицина», 1977.
2.
Стафилококковые
инфекции: российский сб. науч. тр. –
С.-П., 1991.
3.
А.М.Смирнова:
вопросы иммунологии и микробиологии стафилококковых и стрептококковых инфекций
Ленинград, 1975.
4.
Лекция
по теме.
    5. 
Методическая
разработка кафедры. 
Реферат по на тему лаболаторнаю диагностикастафилококовых инфекций. Методы микробиологической диагностики стафилококковой инфекции. Стафилококк Основные принципы микробиологии ческой диагностики. Маннит положительные стафилококки обитающие на теле человека. Микробиологическая диагностика золотистого стафилококка. Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Методика определения стафилококковых антител выгодчиков. Диагностические признаки стафи лококковых отравлений. Сроки готовности результатов посева на стафилококк. Лабораторная диагностика патогенного стафилококка. Лабораторная диагностика стафилакокковой инфекции. Лабораторная диагностика стафилококковой инфекции. Где во владивостоке можно поставить стафилакока. Гиалуронидазная активность бактериями методика.

© 2011 Рефераты